重庆理工大学学报（自然科学） ›› 2019, Vol. 33 ›› Issue (10): 185-190.doi: 10.3969/j.issn.1674-8425(z).2019.10.029
鲁友铭１，２，李俊萱１，吴胜昔１，曾 政２，黄 恒２，李令臣１，侯力嘉１
摘要： 为了实现布鲁氏菌ＢＰ２６蛋白在原核宿主细胞进行高效表达，对布鲁氏菌ＢＰ２６基因进行密码子优化，化学合成了ＢＰ２６全基因，并将其克隆至 ｐＥＴ３０ａ（ ＋ ）载体上，构建重组质粒ｐＥＴ３０ａ（ ＋ ）－ｂｐ２６，转化至基因工程菌ＢＬ２１（ＤＥ３），利用 ＩＰＴＧ 进行诱导表达。利用 Ｈｉｓｔａｇ 镍柱纯化ＢＰ２６重组蛋白，并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果显示：重组质粒经 Ｎｄｅ Ｉ与 ＸｈｏｌＩ 双酶切，酶切产物通过琼脂糖凝胶电泳显示与目的产物条带大小一致；当诱导条件为ＩＰＴＧ浓度１ ｍｍｏｌ／Ｌ，３７℃诱导８ｈ时，重组蛋白的表达量最高；纯化后的目的蛋白经过Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ鉴定，显示在 ２７．８ｋＤ左右有一条明显的蛋白印迹条带，与预期大小相符。本研究成功实现了在大肠杆菌高效表达ＢＰ２６蛋白，为后续布病检测新试剂的研制及疫苗的研发奠定了生物学基础。
中图分类号:
主管单位：重庆市教育委员会