重庆理工大学学报（自然科学） ›› 2019, Vol. 33 ›› Issue (5): 137-141.
李令臣1，2，侯力嘉1，吴胜昔1，李俊萱1，鲁友铭1，徐 缘1，李 志1，曾 政2，梁望旺2
摘要： 为了实现禽流感病毒血凝素（HA）蛋白在原核系统中高效表达，根据Gen Bank发表的HA（ID＝DQ023145.1）基因序列，在不改变HA蛋白氨基酸序列的情况下，根据大肠杆菌密码子偏好性优化基因序列，化学合成HA全基因。将其克隆到pET28a（＋）载体中，构建重组质粒pET28a（＋）－HA，转化至BL21工程菌进行诱导表达，利用His-tag镍柱纯化HA重组蛋白，并对纯化后的重组蛋白进行SDS-PAGE分析及Western-blot鉴定。结果表明：当重组菌株pET28a（＋）－HA／BL21（DE3）诱导条件为30℃、IPTG浓度为1mmol／L诱导8h时，HA蛋白表达量最高；SDS-PAGE电泳显示经镍柱纯化后HA蛋白纯度较高，Western blot实验发现在预期的70kD处有明显的蛋白印迹条带，说明已成功实现了在大肠杆菌中高效表达禽流感病毒HA蛋白，为后续开展禽流感检测方法及疫苗的研究奠定了基础。
中图分类号:
主管单位：重庆市教育委员会