摘要： 为实现甲胎蛋白（ａｌｐｈａｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＦＰ）在原核系统中高效表达，在 ＧｅｎＢａｎｋ上查 找 ＡＦＰ全基因序列（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＮＭ＿００１１３４．２），分析 ＡＦＰ基因序列及大肠杆菌密码子偏 好性优化，化学合成 ＡＦＰ全基因。以 ｐＥＴ２８ａ（＋）作为原核表达载体并转化至 ＢＬ２１（ＤＥ３）感受 态细胞进行诱导表达。利用镍柱纯化 ＡＦＰ重组蛋白，并对纯化的 ＡＦＰ重组蛋白进行 ＳＤＳＰＡＧＥ 纯度分析、ＢＣＡ蛋白浓度测定、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ特异性鉴定。结果表明：ＡＦＰ重组质粒经过 ＮｄｅＩ、 ＸｈｏｌＩ双酶切鉴定，在 １８７５ｂｐ处出现特异性条带，与预期相符合；当诱导条件为 ３０℃，０．１ｍＭ 的 ＩＰＴＧ，诱导 ８ｈ，ＡＦＰ重组蛋白可大量表达；ＢＣＡ法测得 ＡＦＰ重组蛋白浓度达 ０．９２３９ｍｇ／ ｍＬ；纯化后的 ＡＦＰ重组蛋白与市售的 ＡＦＰ单抗进行 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定，结果显示在 ７５ｋＤ处有 明显的蛋白印迹，ｐＥＴ２８ａ（＋）／ＢＬ２１（ＤＥ３）空白组无条带，表明 ＡＦＰ重组蛋白可在大肠杆菌中高 效表达，且经 Ｎｉ柱纯化后具有良好的特异性。研究实现了 ＡＦＰ重组蛋白在大肠杆菌中高效表 达，为后续 ＡＦＰ的检测、以 ＡＦＰ为分子靶点的抗癌药物筛选奠定了基础。

关键词: 肝癌, 甲胎蛋白, 原核表达, 镍柱纯化, 蛋白免疫印迹

中图分类号: 

• Q78