摘要： 为实现人可溶性程序性死亡因子配体１（ｓｏｌｕｂｌｅｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｄｅａｔｈｌｉｇａｎｄ１，ｓＰＤＬ１）在原核表达系统的高效表达，根据ＧｅｎＢａｎｋ发表的ｓＰＤＬ１（ＧｅｎＢａｎｋ登录号：ＡＹ２５４３４２．１）基因序列，在不改变ｓＰＤＬ蛋白氨基酸序列的情况下，根据大肠杆菌密码子偏好性优化基因序列，化学合成ＰＤＬ１胞外域基因全长序列，克隆至质粒载体ｐＥＴ２８ａ（＋），转化至大肠杆菌感受态细胞ＢＬ２１（ＤＥ３）进行诱导表达，利用镍柱对目的蛋白进行纯化。纯化后的目的蛋白经ＳＤＳＰＡＧＥ电泳、蛋白免疫印迹和酶联免疫吸附试验进行生物特性鉴定。结果表明：重组质粒经过ＮｃｏＩ、ＸｈｏｌＩ双酶切鉴定显示在６６８ｂｐ处有一条特异性条带，与预期相符；当诱导条件为０．５ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ、３７℃、９ｈ时，重组蛋白具有最高表达量。纯化产物经过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定，结果显示在２８ＫＤ左右有明显蛋白条带出现，而空白对照组则无条带。ＥＬＩＳＡ鉴定结果显示其可以与进口小鼠抗人ＰＤＬ１单克隆抗体发生较强的反应，说明已成功实现了在大肠杆菌中高效表达ｓＰＤＬ１重组蛋白，可为后续开展ｓＰＤＬ１检测方法的研究奠定基础。

中图分类号: 

• R742