重庆理工大学学报（自然科学） ›› 2020, Vol. 34 ›› Issue (6): 210-215.doi: 10.3969/j.issn.1674-8425（Z）.2020.06.031
李赛男，刘文华，钟佩桥，赵海洲，杨永盼
摘要： 杆状病毒核心基因 ａｃ７８在杆状病毒的生活周期中具有重要作用。生物信息学分 析发现，Ａｃ７８与斯氏假单胞菌的细胞色素 Ｃ氧化酶 ｃｂｂ３型亚基 ＩＩＩ具有一定的序列一致性，表 明 Ａｃ７８可能具有氧化酶活性，并在氧化还原反应中具有一定功能。用 ＰＣＲ的方法成功扩增得 到 ａｃ７８基因，该基因序列与 ＧｅｎＢａｎｋ上的苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ｍｕｌｔｉｐｌｅｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ，ＡｃＭＮＰＶ）ａｃ７８基因的核苷酸同源性 １００％，将其克隆至原核表达 载体 ｐＱＥ３０，构建了 ａｃ７８基因原核表达质粒，转化大肠杆菌 Ｍ１５［ｐＲＥＰ４］，在 １ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ和 低温诱导下超量表达了可溶性的目的蛋白。使用 ＮｉＮＴＡＲｅｓｉｎ蛋白纯化树脂获得了较纯的含 有 ６×Ｈｉｓ接头的 Ａｃ７８蛋白，使用纯化细胞色素 Ｃ氧化酶活性测定试剂盒测定其细胞色素 Ｃ氧 化酶活性，结果为阴性，表明 Ａｃ７８可能不具有细胞色素 Ｃ氧化酶活性。上述研究结果为深入探 究 Ａｃ７８的作用机理打下了坚实的基础。
中图分类号:
主管单位：重庆市教育委员会