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脱γ羧基凝血酶原蛋白的原核表达与鉴定
龚吕鸿, 徐 丽, 刘雅楠, 吴胜昔, 许 东, 秦 萍, 韦广苗, 曾 鹏
2023 (5):
331-336.
摘要
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为实现脱γ羧基凝血酶原(desγcarboxyprothrombin,DCP)在原核系统中高效表
达,参考 GenBank中发布的 DCP基因 CDS序列(LX095963),在保证 DCP蛋白氨基酸序列正确
的基础上,优化该基因的密码子;化学合成 CDS序列基因,并将其融合至 pET28a(+)质粒中,
构建 pET28a(+)/DCP重组质粒;将该质粒转化至感受态 BL21(DE3)中进行诱导表达,利用 Ni
柱纯化 DCP蛋白,进行 DCP重组蛋白纯度检测、浓度测定及蛋白印迹分析。结果表明:重组质
粒在 1875bp处的双酶切条带,经测序后与已优化的基因序列完全切合。重组菌的 DCP蛋白表
达最高时,诱导条件为 25℃、IPTG终浓度为 0.8mmol/L、时间 6h;经 Ni柱纯化后的 DCP重组
蛋白纯度较高,浓度达 1.04mg/mL;在 72kD处有明显的蛋白条带,切合预期。在大肠杆菌系
统中成功表达出 DCP蛋白,为后续 DCP检测方法研究提供试剂参考。
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